Отчет по изучению интерфероногенной активности препарата Флараксин.
Институт микробиологии и вирусологии имени Д.К.Заболотного
Отдел проблем интерферона и иммуномодуляторов
Руководитель исследования:
Зав. Отделом проблем
интерферона и иммуномодуляторов,
Заслуженный изобретатель Украины,
доктор биолог.наук, профессор,
член-корр-т НАН Украины - Н.Я.Спивак
Цель экспериментального исследования
Изучить интерферон индуцирующую активность Флараксина в опытах in vitro на белых беспородных мышах /самцы, масса.тела 18-20 г./.
Материалы и методы
Препарат разводили на 5% растворе глюкозы. Вводили по 0,2 мл внутрибрюшинно, в концентрации 5,50g и 250g на мышь. В качестве контроля использовали известный индуктор интерферона Polу I:C /”Sigma”/, а также 5% раствор глюкозы или физиологический раствор /плацебо/.
Через 6, 24, 48 и 72 ч. мьшей декапитировали и получали плазму крови, в которой тестировали уровень интерферона. Кроме того, определяли фактор некроза опухоли.
Наличие интерферона определяли по подавлению цитопатогенного действия тест-вируса / вируса везикулярного стоматита шт. Индиана в дозе 100 ЦПД 50/ в культуре перевиваемых клеток L-929 или ПТП, выращенных в 96-луночных культуральных панелях /Linbro/. За титр интерферона принимали величину, обратную разведению пробы, при котором наблюдается 50% защита клеток от цитопатогенного действия тест-вируса.
Активность фактора некроза опухоли в плазме определяли по цитолитическому действию на обработанных актиномицином-Д/"Serva"/ клетках мишенях L-929, используя спектрофотометрический тест с кристаллическим фиолетовым /Методические рекомендации, Киев, 1994/
Результаты изучения
Результаты определения уровней интерферона представлены в таблице 1.
Как следует из таблицы 1, Флараксин обладает интерферогенной активностью. Так доза 5g/мышь уже обладала этой способностью. Однако наиболее оптимальной дозой является 50 g/мышь. При использовании этой дозы уровень интерферона в организме животных наиболее высокий и сохраняется на протяжении длительного периода времени /на протяжении 72 часов/. В то же время все известные индукторы интерферона, и в том числе Pоly І:С, обладают коротким сроком действия при индукции интерферона.
| Титр интерферона в условных еденицах [ед./мл] | |||
|---|---|---|---|
| Время после введения препарата | |||
| 6 ч | 24 ч | 48 ч | 72 ч |
| Флараксин / 5g / | 40 | 40 | 40 |
| Флараксин / 50g / | 320 | 320 | 160 |
| Флараксин / 250g / | 80 | 80 | 40 |
| Poly I:C / 50g / | 320 | 40 | <40 |
| 5% глюкоза | <4 | <4 | <4 |
| Физ-раствор | <4 | <4 | <4 |
| Титр интерферона в условных еденицах [ед./мл] | ||||
|---|---|---|---|---|
| Индуктор интерферона | Спленоциты интактных животных / 24 ч / |
Спленоциты мышей после введения Флараксина / 24 ч / |
Спленоциты интактных животных / 72 ч / |
Спленоциты мышей после введения Флараксина / 72 ч / |
| ВБН опыт 1 | 640 | 640 | 320 | 640 |
| ВБН опыт 1 | 320 | 640 | 320 | 640 |
| ФГА опыт 1 | 80 | 160 | 40 | 160 |
| ФГА опыт 2 | 80 | 160 | 40 | 320 |
Примечание: Здесь и в последующих таблицах приняли следующие условные обозначения: ВБН – вирус Болезни Ньюкасла; ФГА - фитогемаглютинин. Интактные животные - животные контрольной группы, за которыми ведут наблюдения параллельно с подопытными животными.
Поэтому свойство Флараксина длительное время поддерживать продукцию интерферона делает его чрезвычайно интересным и перспективным для использования при лечении и профилактике предопухолевых, опухолевых процессов, а также вирусных инфекций ЦНС и, так называемых, медленных вирусных инфекций к которым относится СПИД, рассеянный склероз и др.
В другой серии опытов через 24 и 72 часа после введения животным оптимальной дозы препарата / 50 g/мышь /, у животных забирали селезенку, готовили взвесь спленоцитов и изучали функциональные способности иммунокомпетентных клеток к продукции интерферона in vitro, а также определяли тип индуцированного интерферона / IgA или IgG /.
Для этого к взвеси спленоцитов добавляли индукторы интерферона -Вирус Болезни Ньюкасла (ВБН) и Фитогемаглютинин (ФГА). Контролем служили спленоциты интактных животных.
Результаты этих исследований представлены в Табл.2. Полученные данные свидетельствуют о некотором увеличении способности спленоцитов животных, которым ранее вводили препарат, синтезировать интерферон in vitro под влиянием интерфероногена. Как следует из Табл.2, при использовании в качестве индуктора интерферона Вируса Болезни Ньюкасла (ВБН), т.е. при индукции α-интерферона, синтез α-интерферона увеличивается в 2 раза (если Флараксин вводили за 72 часа до взятия у мышей ceлeзeнки ).
При использовании в качестве индуктора интерферона Фитогемаглютинина ФГА (индуктор γ-интерферона) происходит более значительное усиление продукции интерферона - в 4 раза, если вводили Флараксин за 72 часа до взятия у мышей селезенки.
Эти данные могут быть использованы для отработки оптимальной схемы введения препарата для лечения.
Кроме того, изучали наличие фактора некроза опухоли в плазме животных после введения мышам Флараксина. При этом установлено, что только использование высоких доз препарата (250 g/мышь) приводило к существенному повышению уровня Фактора Некроза Опухолей (ФНО) по сравнению с контролем.
Что же касается типа индуцированного интерферона, то он оказался термолабильным (неустойчивым к изменению температуры), что характерно для γ-интерферона, но для окончательного утверждения необходимо провести дополнительные исследования по кислотолабильности (неустойчивость к окислительным процессам) и антигенной специфичности ( способности вызывать синтез антител).
ВЫВОДЫ
Таким образом, на основании проведенных исследований установлено, что препарат Флараксин обладает интерфероногенной активностью, а также индуцирует в организме образование фактора некроза опухоли.
Необходимо проведение дополнительных исследований по определению оптимальных схем введения препарата, учитывая явления гипореактивности (слабая сопротивляемость организма болезням) на частые введения индуктора интерферона.
Руководитель исследования:
Зав. Отделом проблем
интерферона и иммуномодуляторов,
доктор мед. наук, профессор - Н.Я.Спивак
